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基于細胞標志物的流式分析

流式細胞實驗細胞樣品制備

2019-04-15 - 青木生物

?????? 流式細胞術的實驗檢測對象是單細胞懸液。通常被測樣品要求至少有20000個細胞,細胞濃度為105-107/mL。

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懸浮/貼壁細胞

?????? 懸浮細胞(貼壁細胞需經胰酶消化2-3min顯微鏡觀察細胞有脫落趨勢即刻棄去胰酶)直接收集細胞于離心管中。離心后收集沉淀,用PBS重懸,取適量細胞于EP管中,加入流式抗體后上樣分析。

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外周血

?????? 對于不含中心粒細胞的外周血單個核細胞(PBMC),采用Ficoll密度梯度離心;含中性粒細胞的外周血白細胞,先用紅細胞裂解液(RBC)裂紅,多次低速離心后去除紅細胞碎片。

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胸水、腹水、腦脊液等體液樣品

?????? 將體液樣本離心,棄上清后PBS重懸,加入流式抗體后即可上樣分析。

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實體臟器樣品

?????? 先將臟器剪碎后用胰蛋白酶或膠原酶消化組織塊:

胰蛋白酶適于消化細胞間質較少的軟組織,如胚胎、上皮、肝、腎等組織。工作濃度一般為0.1%-0.5%,作用時間20-60min。

膠原酶適于纖維較多或較硬的癌組織,對組織中膠原蛋白類結構消化作用強。工作濃度一般為0.1-0.3 ug/mL,作用時間4-48hr。